Центральная научно-исследовательская лаборатория
ГОО ВПО "ДонНМУ им. М. Горького"

МЕТОД
определения АКТИВНОСТИ ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА в сыворотке крови (метод Ревина)

Принцип метода.
      Метод базируется на окислении п-фенилендиамина при участии церулоплазмина. По оптической плотности образующихся продуктов судят об активности церулоплазмина.
Реактивы.
1. 0,5 % водный раствор перекристаллизированного п-фенилендиамин-дигидрохлорид: 500 мг в 100 мл дистиллированной воды. Хранить в холодильнике в склянке из темного стекла.
2. 0,4 М ацетатного буфера, рН 5,5. Получают из двух исходных растворов (“а” и “б”):
а) 54,44 г ацетата натрия растворяют в 1 л дистиллированной воды;
б) 22,6 мл ледяной уксусной кислоты доводят дистиллированной водой до 1 л.
 Описанные растворы смешивают в соотношении 9:1. Буфер готовят в большом количестве, в объеме 1 л с добавлением к 900 мл раствора “а” 100 мл раствора “б”. Буферный раствор хранят в холодильнике.
3. 3 % раствор фтористого натрия.
   Вместо фтористого натрия можно использовать 0,5 % водный раствор азида натрия (500 мг азида натрия в 100 мл дистиллированной воды).  
Ход определения.

Ингредиенты

Опытная проба, мл

Контрольная проба, мл

Сыворотка крови (плазма)

0,05

0,05

0,5 % р-р азида натрия

-

0,5

Ацетатный буфер

4,0

4,0

Р-р № 1

0,5

0,5

встряхивают, ставят на 1 час в водяной бане при 37оС

Азид натрия

0,5

 

Перемешать, поставить в холодильник на 30 мин при + 40С.

      
      Колориметрируют при длине волны 530 нм, на Спекорде, кювета 1 см против контроля.

Расчет:      Сцп мкмоль/л = Еоп х 6,475 (коэффициент пересчета)
Норма:       1,85 – 3,33 мкмоль/л.
Источник.   Горячковский А. М. Клиническая биохимия // Одесса: Астропринт, 1998. – 608 с.

Новое на сайте