Центральная научно-исследовательская лаборатория
ГОО ВПО "ДонНМУ им. М. Горького"

МЕТОД
определения количества ТРИГЛИЦЕРИДОВ
в сыворотке крови

Набор реактивов фирмы Плива (Чехия)

Принцип метода: ферментативный.
Триглицериды  - липаза - глицерол + свободные жирные кислоты
Глицерол + АТФ   - ГК- глицерол-3-фосфат + АДФ
Глицерол-3-фосфат + О2  - ГФО-  фосфат дигидроксиацетона + Н2О2
2 Н2О2 + 4-аминоантипирин + 4-хлорфенол - ПОД - хиноминин + 4 Н2О
Состав реактивов
R1 Реагент   1 х 250 мл
Буфер ГУДА (рН 7,2)                    50 ммоль/л
4-хлорфенол                                  4 ммоль/л
Mg2+                                           15 ммоль/л
АТФ                                              2 ммоль/л
Глицеролкиназа                           >6,7 мккат/л
Пероксидаза                              >32,7 мккат/л
Липазы                                      >32,7 мккат/л
Глицерол-3-фосфатоксидаза        >8,2 мккат/л
4-аминоантипирин                     0,495 ммоль/л
R2 Стандарт   1 х 3 мл
Триглицериды                            2,3 ммоль/л
Состав реакционной смеси
Буфер ГУДА (рН 7,2)                 49,5 ммоль/л
4-хлорфенол                               3,96 ммоль/л
Mg2+                                        14,85 ммоль/л
АТФ                                           1,98 ммоль/л
Глицеролкиназа                         >6,6 мккат/л
Пероксидаза                            >32,7 мккат/л
Липазы                                    >32,7 мккат/л
Глицерол-3-фосфатоксидаза     >8,2 мккат/л
4-аминоантипирин                    0,495 ммоль/л
Приготовление и стабильность рабочих реагентов. Реагент 1 и стандарт жидкие, готовые для использования. Реагент и стандарт стабильны до достижения указанного на упаковке срока годности, если хранится при (+2 – +8)0С, в защищенном от света месте. После вскрытия, реагент 1 стабилен до указанного срока годности, если хранится при (+2 – +8)0С, в тщательно закрытых флаконах, в защищенном от света месте. Избегать контаминации.
Образцы
Сыворотка, гепаринизированная или ЭДТА плазма. Избегать гемолиза!
Стабильность триглицеридов в сыворотке и плазме: 10 дней при (+4 – +8)0С.
Проведение анализа:
Длина волны:                  500, (546) нм
Оптический путь:            1 см
Температура:                  (+20 – +25)0С, +370С
Объемные соотношения: образец/реакционная смесь 1/101 (
Объемы образца и реагентов могут быть изменены при сохранении соотношения реагент/образец)
Расчеты
                 Триглицериды (ммоль/л)= (Аобрбланк)/(Акалбланк)*Скал
Скал =концентрация стандарта (калибратора)
Фактор пересчета: ммоль/л=0,0113 х мг/дл
Нормальные величины: Триглицериды в плазме (сыворотке) - до 1,85 ммоль/л
Рабочие характеристики:
Линейность:                                                до 11,4 ммоль/л
Чувствительность:                                           0,03 ммоль/л
Нижний предел определения                            0,1 ммоль/л
Диапазон измерений:                                       0,1 – 11,4 ммоль/л
Воспроизводимость                                        ±5 %
Калибровка: Для калибровки используют стандарт, входящий в набор или Лионор калибратор.
Контроль правильности осуществляют контрольными сыворотками Лионорм U и Лионорм Р (Лахема), «Биокот-С» (Россия, Москва).

 

Реагент бланк

Стандарт (калибратор)

Образец

Реагент R1

1,00 мл

1,00 мл

1,00 мл

Образец

-

-

0,01 мл

Стандарт (калибратор)

-

0,01 мл

-

Дист. вода

0,01 мл

-

-

Смешать, инкубировать 10 мин при 370С или 20 мин при 20-250С. Измерить поглощение образца Аобр и стандарта (калибратора) Акал относительно реагента бланка. Стабильность окраски 1 час.

Значения указанных контрольных сывороток:

Контрольный материал

Среднее значение

Интервалы

Единица измерения

Lyonorm U

0,66

0,53-0,79

ммол

Lyonorm P

0,86

0,69-1,03

ммол/л

Биоконт-С

0,20

0,16-0,24

ммоль/л


Источник: инструкция к набору реактивов для определения триглицеридов в сыворотке крови (Плива, Чехия).