Центральная научно-исследовательская лаборатория
ГОО ВПО "ДонНМУ им. М. Горького"

 

 

МЕТОД
определения количества ГЛИКИРОВАННОГО ГЕМОГЛОБИНА
в эритроцитах колориметрическим методом

 

Принцип метода: гемолизат эритроцитов подвергают кислотному гидролизу с образованием 5-оксиметилфурфурола, который определяют спектрофотометрически по реакции с тиобарбитуровой кислотой. Это позволяет судить об уровне HbA1c в эритроцитах.
Реактивы:
1. 0,3н. раствор щавелевой кислоты.
2. 40 % раствор трихлорусусной кислоты (ТХУ).
3. 0,05 М раствор тиобарбитуровой кислоты (ТБК)
4. Физиологический раствор.

 

Забор крови: В центрифужную пробирку с гепарином или цитратом натрия берется 3 мл крови.

Приготовление гемолизата эритроцитов: Взятую кровь центрифугируют, плазму отбирают, эритроциты промывают 3 раза физиологическим раствором. Полученную эритроцитарную массу гемолизируют, добавляя бидистиллированную воду (1 объём эритроцитов: 9 объёмов бидистиллированной воды) и тщательно перемешивают.

Ход определения: К 2 мл гемолизата добавляют 1 мл 0,3 % н. раствора щавелевой кислоты, помещают в центрифужную пробирку с притертой пробкой и инкубируют 1 час в кипящей водяной бане при 1000С. Охлаждают при комнатной температуре. Добавляют 1 мл 40 % раствора ТХУ и хорошо взбалтывают. Центрифугируют 10 минут при 3000 об/мин. К 2 мл надосадочной жидкости прибавляют 0,5 мл 0,05 М раствора ТБК и перемешивают. Икубируют при 400С 40 минут.
Экстинкцию раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны 443 нм в кювете 1 см.

Расчет: Концентрацию гликированного гемоглобина расчитывают, исходя из того, что 1 % гемоглобина равен оптической плотности 0,029, то есть:
                 
Х =(экстинкция раствора / 0,029) = % HbA1c

Источники:

Гриншпун М. Н., Галенок В. А., Мазовецкий  А. Г., Диккер В. Е. Сравнительный анализ методов определения гликозированного гемоглобина//Лаб. дело. - 1988. - № 2. - С. 51-54.
Данилова Л. А., Лопатина Н. И. Колориметрический метод определения гликозилированных гемоглобинов. - Лаб. дело. - 1986. - № 5. - С. 281-283.
Scheiher E. D., Mayer R., Wagner E. M.//Clin. Chem. – 1988. –Vol, 34, N 2. – P.320-323.

 

Новое на сайте