Центральная научно-исследовательская лаборатория Донецкого национального медицинского университета им. М. Горького

МЕТОД
определения количества HDL-ХОЛЕСТЕРИНА
в
сыворотке крови

Принцип метода: HDL-холестерин определяют в надосадочной жидкости после осаждения пробы осаждающим раствором из набора БИО-ЛА-ТЕСТ Оксохром ХОЛЕСТЕРИН.
Реактивы:
1 Осаждающий раствор                                                          (50 мл)
      фосфовольфрамовая кислота 0,56 ммоль/л
      
магний хлористый 30 ммоль/л
Проведение анализа: Длина волны 498 нм (460-540) нм, кювета 1 см, температура (37+0,1)°С. В пробирку вносят 0,50 мл сыворотки и 1,00 реактива 1. Премешивают, оставляют стоять 10 мин при (+15 -+25)° С и центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин.
В 3 пробирки вносят 200 мкл надосадочной жидкости (проба). 200 мкл дистиллированной воды + 20 мкл стандартного раствора (эталон), 200 мл дист. воды (бланк) и добавляют 2,00 мл рабочего раствора для определения общего холестерина из набора Оксохром Холестерин.
Инкубируют 20 мин при 37°С или 30 мин при (+15 - +25)°С. Инкубационную смесь следует защищать от воздействия прямого солнечного света. До истечении 10 мин после окончания инкубации измеряют оптическую плотность пробы (А1) и эталона (А2) против бланка в кюветах нагретых до данной температуры инкубации.
Расчет: HDL-холестерин (ммоль/л) = 1,537х( А1 /А2)
Воспроизводимость: Около ± 10 - 12 %
Контроль правильности осуществляется контрольными сыворотками Лионорм U и Лионорм Р (Лахема).
Значения указанных контрольных сывороток:

Контрольный материал

Среднее значение

Интервалы

Единица измерения

Lyonorm U

1,07

0,96-1,18

ммоль/л

Lyonorm P

0,62

0,55-0,68

ммоль/л

Предупреждение:При определении в плазме употребляют К2ЭДТА (1 мг/мл крови) как антикоагулянт. Определению мешают флуорид, оксалат и цитрат. Надосадочная жидкость должна быть после центрифугирования прозрачной. Если это не достигается, то следует разбавить сыворотку физиологическим раствором в соотношении 1+1 и осаждение провести повторно (результат х 2).
Источник: инструкция к набору реактивов для определения HDL-холестерина в сыворотке крови (Плива, Чехия).